GIBCO胎牛血清、GIBCO血清價(jià)格

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的Gibco胎牛血 清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的Gibco美國(guó) 胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的Gibco FBS或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體 細(xì)胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。

Gibco胎牛血清保存方法
1、需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無(wú)法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/p>

2、一般廠商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾,切勿直接 過(guò)濾血清。

3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體 參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物 的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑 點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。

Gibco胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題總結(jié)
一、血清滅活問(wèn)題。

1、問(wèn)：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實(shí)驗(yàn)了。

2、問(wèn)：Gibco胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長(zhǎng)因子。 但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問(wèn)：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎？

答：進(jìn)口的一般都已滅活，國(guó)產(chǎn)的不一定，還是滅活一下再用較安全。

4、問(wèn)：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體，是不是會(huì)影 響轉(zhuǎn)染？我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會(huì)和病毒相結(jié)合，影響轉(zhuǎn)染，正確嗎？細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞， 病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無(wú)血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對(duì)病毒和宿主 結(jié)合過(guò)程的干擾，一般是2-6小時(shí)，根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活 ！這要根據(jù)實(shí)際情況而定，如果沒(méi)有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。

5、問(wèn)：(1)我買的是Gibco北美胎牛血清，要滅活嗎？有些說(shuō)法是需要，有些說(shuō)直接解凍后就可以加入到培 養(yǎng)基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有關(guān)系嗎？

答：關(guān)于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭(zhēng)議的話題。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室將血清的熱滅活還是作為 常規(guī)來(lái)執(zhí)行，因?yàn)橛袃蓚€(gè)作用，是滅活補(bǔ)體，第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實(shí)驗(yàn)者并沒(méi)有考慮熱處 理對(duì)血清中的生長(zhǎng)因子、氨基酸等成分帶來(lái)的負(fù)面影響。

我在實(shí)驗(yàn)室處理血清的時(shí)候，有一次水浴箱在滅活過(guò)程中出現(xiàn)故障，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀 ，我重新處理了另外一份血清，將兩份血清對(duì)比，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時(shí)以 上，肯定也會(huì)對(duì)里面的蛋白起到破壞作用。下次有機(jī)會(huì)我做個(gè)延長(zhǎng)滅活時(shí)間的實(shí)驗(yàn)試試，看看到底有多大的影響。熱 滅活之后，血清放在四度冰箱久了，就會(huì)有沉淀產(chǎn)生，這常常會(huì)被認(rèn)為是微生物污染或者是黑膠蟲(chóng)污染。為了驗(yàn)證到 底有沒(méi)有污染，常常又會(huì)把血清放置37℃溫育，但是血清中的蛋白會(huì)進(jìn)一步析出，后還是要做鏡檢，無(wú)菌培養(yǎng)試驗(yàn) ，和革蘭氏染色試驗(yàn)，非常麻煩。

我看過(guò)一份資料，里面提到70%的實(shí)驗(yàn)者認(rèn)為滅活是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間， 而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高 ，許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立，只有少數(shù)對(duì)血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效 性和必要性。有人比較過(guò)11個(gè)不同細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對(duì)6 個(gè)細(xì)胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纖維細(xì)胞，MRC-5) 的生長(zhǎng)帶來(lái)負(fù)面影響，三個(gè)細(xì)胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響，而只有兩個(gè)細(xì)胞株(Balb/3T3， Sp2/0Ag14 hybrid)，在熱滅活之后，細(xì)胞生長(zhǎng)有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi) 有明顯的促進(jìn)作用。

你可以摸索一下，血清從-20℃冰箱拿出來(lái)之后在常溫解凍，然后混勻分裝成兩份，一份滅活，一份不滅活 ，比較這兩種血清對(duì)細(xì)胞是否有影響。然后再確定是滅活還是不滅活。這個(gè)過(guò)程多也就一個(gè)星期。同時(shí)你還要考慮 血清滅活與否對(duì)你后續(xù)的實(shí)驗(yàn)有沒(méi)有影響。

問(wèn)：(2)分裝后的血清從-20℃取出放4℃讓其液化，卻見(jiàn)血清比較混濁，有沉淀產(chǎn)生，這屬正常嗎？

答：正常。